抗人Hb胶体金检测试剂条的应用

抗人Hb胶体金检测试剂条的应用

多年以来，血痕的种属鉴定一直沿用如环状沉淀试验、琼脂糖凝胶扩散试验、对流免疫电泳等较为陈旧而繁琐的方法。这些检验方法存在着许多方面的缺陷，如灵敏度低、耗时长、方法繁琐、检材用量大等，不能适应基层法医工作的需要。本文应用公安部物证鉴定中心提供的抗人Hb胶体金检测试剂条对不同稀释度的人全血，人及牛、马、驴、骡、猪、羊、狗、鸡、鸭9种动物血斑检材及保存1年内的凶器上提取的人血斑迹在室温下（170C-250C）进行检测，结果表明抗人Hb胶体金检测试剂条具有简单、快速、准确、灵敏、高度特异性的优点，在法医检验中易于推广应用。现报道如下。

一、材料和方法

1.材料

抗人Hb胶体金检测试剂条

健康人全血10份混匀，冻融后，按二五稀释法稀释至50万倍。健康人血痕（时间一星期至3年不等，室温保存），室温保存的牛、马、驴、骡、猪、羊、狗、鸡、鸭9种动物血斑检材各5份，分别浸泡后定量稀释1000倍浓度；凶器上提取的已确证为人血的斑迹10份及相应载体空白处擦拭物10份（时间一天至1年不等），分别浸泡后定量稀释1000倍浓度。

2.方法

取0.5ml塑料离心管，向管内加入0.3ml样品；取抗人Hb胶体金检测试剂条插入管内，待液体在反应膜片上扩散后，观察结果(5分钟内)。

二、结   果

1.结果判定

当反应区出现两条紫红色带(A、B带)时，结果为阳性；当反应区仅出现一条紫色带(B带)，并靠进吸附区时，结果为阴性；当靠近吸附区侧无色带(B带)出现时，反应无效，应重新进行测试。其结果可长期保存。

2.灵敏度检测

用不同稀释倍数的人血进行检测。可以看出，当人血浓度稀释度达10万倍时反应还较明显，但50万倍时则无反应。

3.特异性测试

将人及牛、马、驴、骡、猪、羊、狗、鸡、鸭9种动物血斑检材用生理盐水浸泡稀释1000倍后进行测试。   

5分钟内上述各种动物血与抗人Hb胶体金检测试剂条均呈阴性反应。                        

4.pH值的影响

取稀释成1/1000的人血及各种动物血，在pH值分别为5和9时进行检测，观察5分钟。人血为阳性，其它动物血均为阴性。

5.实测

用抗人Hb胶体金检测试剂条对稀释1000倍的10份已确证为人血的凶器上斑迹及相应载体空白处擦拭物浸泡液进行测试，结果完全正确。

三、讨  论

免疫胶体金层析试剂条是结合抗原抗体的免疫学反应和层析原理制备而成的。当被检溶液中含有胶体金抗体的对应抗原物质时，抗体会识别抗原分子上它的抗原决定簇并发生免疫结合反应而形成由胶体金粒子携带的抗体抗原复合物，在试剂条上部材料吸水张力的牵引下，胶体金粒子就犹如分子筛柱层析中的大分子物质一样，在硝酸纤维素膜的孔径中发生层析，并先到达硝酸纤维素膜上点加了针对同一抗原的另一个抗体的位置（检测线），这样由胶体金粒子携带来的抗体抗原复合物中抗原分子上的抗原决定簇也会为此处它的对应抗体识别并结合，其结果便是在此处形成“胶体金携带的抗体+抗原+另一抗体”的夹心结构，并固定于此而显示胶体金的红色，其余未反应的免疫胶体金粒子则继续层析，当到达点加了羊抗鼠IgG的位置时（质控线），胶体金抗体会被其抗体结合而固定住，从而在此处也出现红色，这种有两个红色标志的结果为阳性结果。但若被检测溶液中无抗原物质或抗原物质含量极低无法足以使胶体金显出红色，则硝酸纤维素膜上点加了另一抗体的位置（检测线）就不会有红色出现，但点加了羊抗鼠IgG的位置（质控线处）仍会有红色出现，这是阴性结果。若无任何红色出现，试剂条失效。

四、小  结

测试结果表明，抗人Hb胶体金检测试剂条的灵敏度很高，特异性也好，不受温度、pH 等环境因素的影响，是一种简单、快速、灵敏、稳定、异性好的种属鉴定检验方法。该试剂条插入浸出液后1分钟即在反应区就能看到反应，2分钟后结果清晰可见，以后逐渐加深呈紫红色；终止反应后，结果可长期保存，在法医检案中极易推广应用。